Brote de histoplasmosis en la Escuela de Cadetes de la Base Aérea de Morón, Provincia de Buenos Aires, República Argentina / Histoplasmosis outbreak in Morón, Buenos Aires Province, Argentina

Se describe un brote de histoplasmosis que afectó a 6 cadetes de la Fuerza Aérea Argentina, sin antecedentes patológicos previos. Todos consultaron por problemas respiratorios después de haber limpiado un hangar. En ese recinto se encontraron abundantes deyecciones de animales, presuntamente de palomas y murciélagos. Los pacientes sufrieron fiebre, mialgias, taquipnea y tos no productiva. Las radiografías y tomografías de tórax mostraron imágenes pulmonares micronodulares, engrosamiento de los tabiques interalveolares y adenopatías hiliares. Todos tuvieron una evolución favorable y no requirieron tratamiento antifúngico. Las pruebas de inmunodifusión y contrainmunoelectroforesis con antígenos de Histoplasma capsulatum fueron positivas, al igual que las intradermorreacciones con histoplasmina. Se recogieron 5 muestras de tierra del lugar, las que fueron inoculadas por vía intraperitoneal a 20 hámsteres. De los cultivos de hígado y bazo de dichos animales se consiguió aislar la fase micelial de H. capsulatum. La cepa aislada se comparó con las obtenidas de 12 pacientes argentinos utilizando perfiles genéticos y se observó un clado único con más de 96% de similitud, lo que confirma la homogeneidad de las cepas argentinas. Si bien la histoplasmosis es endémica en la Pampa húmeda, este es el primer brote totalmente documentado al sur del paralelo 34°.

An histoplasmosis outbreak affecting 6 previously healthy Air Force cadets is herein presented. The patients suffered from fever and respiratory symptoms after having cleaned an abandoned hangar soiled with pigeons and bat droppings. They all presented fever, myalgia, tachypnea, and nonproductive cough. Chest X-ray and CT scan studies showed disseminated reticulonodular images affecting both lungs. Hiliar adenomegalies were also observed. All patients achieved a favourable outcome without antifungal treatment. Both serologic tests searching for specificic antibodies (immunodiffusion and counterimmunoelectrophoresis) and histoplasmin skin tests were positive in all cases. Five soil samples mixed with pigeons and bat droppings were collected from the hangar. Suspensions of these samples were inoculated into 20 hamsters by intraperitoneal injection; mycelial phase of H. capsulatum was isolated from liver and spleen cultures. The genetic profile of this strain was compared with 12 isolates obtained from Argentinean patients, and a great degree of homogeneity was observed (> 96% similarity). Although histoplasmosis is endemic in the wet Pampas, this is the first epidemic outbreak reported south of the 34th parallel.

Comparación de métodos de extracción de ADN de sangre para detectar ADN fúngico por PCR / Comparison of different methods of DNA extraction from blood to detect fungal DNA by PCR

La infección fúngica invasora (IFI) está asociada a un alto índice de mortalidad, que alcanza el 50% debido a la frecuente falla en el tratamiento antifúngico. Existen dificultades para realizar un diagnóstico micológico rápido y certero dada la baja sensibilidad de los métodos convencionales, especialmente en pacientes neutropénicos y con SIDA. Numerosos métodos para diagnosticar infecciones micóticas basados en el estudio del ADN fúngico están actualmente en desarrollo. Nosotros evaluamos la utilidad de dos procedimientos de extracción y purificación del ADN fúngico presente en sangre para su posterior detección por PCR. Ambos métodos resultaron igualmente eficientes para obtener ADNs de óptima calidad y para realizar la técnica de PCR con los iniciadores universales para hongos ITS 1 e ITS 4.

Invasive fungal infections (IFI) are associated with high mortality by reaching levels of 50%, and also with a significant failure in antifungical treatments. This fact mostly obeys to difficulties in obtaining a fast and accurate mycologic diagnosis due to the low sensitivity of conventional methods, mainly in neutropenic and AIDS patients. Various methods based on fungal DNA study are currently being used for the diagnosis of mycotic infections. We herein evaluated two procedures of extraction and purification of fungal DNA in blood for their use in PCR detection. Both of them showed equal efficiency in obtaining high performance DNA with universal primers ITS 1and ITS 4 as target.

Prevalencia de Candida albicans y Candida no albicans en diferentes muestras clínicas: Período 1999-2001 / Prevalence of Candida albicansand Candida no albicans inclinical samples during 1999-2001

Las levaduras implicadas en procesos patológicos son de indiscutible importancia debido al incremento experimentado por estas infecciones en las últimas décadas, a los cambios observados en las especies causales y al uso empírico de antifúngicos. En el Centro de Micología se estudiaron 1006 aislamientos provenientes de una amplia gama de muestras clínicas durante el periodo 1999-2001. Candida albicans con 40,3% resultó la especie de mayor frecuencia de aislamiento, pero las especies de Candida no albicans con 54,9% resultaron de mayor prevalencia y el 4,8% fueron otras levaduras. En los hemocultivos Candida parapsilosis con 34,9%, C. albicans con 30,2% y C. tropicalis con 25,6% resultaron las más recuperadas, mientras que C. glabrata se presentó con un 2,3%. En las secreciones mucosas C.albicans con 60%-80% fue la especie preponderante. Hemos detectado especies de Candida causantes de mediastinitis, lo que nos alerta sobre su importancia en estos procesos. Las infecciones del tracto urinario por levaduras se detectaron en mayor frecuencia en individuos hospitalizados, resultando C. albicans con 47,7% la especie más aislada, y dentro de Candida no albicans, C. glabrata con 24,8% y C. tropicalis con 20,0%. En las onixis candidiásicas C. parapsilosis con 37,7% desplazó a C.albicans con 22,0% de este lugar anatómico. Los estudios de sensiblidad al fluconazol de las especies de Candida nos permiten concluir que C.albicans es una especie sensible y que los mayores porcentajes de resistencia se observaron en C. glabrata (21,41%) y and C. krusei (69,23%).

The importance of epidemiological monitoring of yeasts involved in pathologic processes is unquestionable due to the increase of these infections over the last decade, the changes observed in species causing candidiasis, and empirical antifungal treatment. At the Mycology Center, 1006 isolates from a wide range of clinical samples were studied during 1999-2001. Candida albicans (40.3%) was the most isolated species, although, the Candida no albicans species with 54.9% showed the major prevalence. In blood cultures Candida parapsilosis (34.9%), C. albicans (30.2%) and C. tropicalis (25.6%) were recovered most frequently while C. glabrata represented only 2.3%. C. albicans with 60%-80% was the predominant specie in mucosal surface. We also detected Candida mediastinistis, which alert us over the importance at this location. Urinary tract infections caused by yeasts were more frequent in hospitalized patients, being C. albicans (47.7%), the most commonly isolated, followed by C. glabrata (24.8%) and C. tropicalis (20.0%). In the candidal onychomycoses, C. parapsilosis (37.7%) outplaced C. albicans (22.0%). Fluconazole susceptibility studies of Candida species allowed us to conclude that the majority of C. albicans islolates are susceptible, and that the highest resistance averages were observed in C. glabrata (21.41%) and C. krusei (69.23%).

Susceptibility of Candida species to fluconazole assayed by a disk diffusion method with automated reading versus a microdilution method

In vitro susceptibilities of 290 isolates of Candida spp to fluconazole were evaluated by a new NCCLS M44-P agar disk diffusion method that was read and interpreted automatically by the BIOMIC image-analysis plate reader system. Disk test results were compared to results obtained by a modified NCCLS M27-A broth microdilution method using RPMI-1640 supplemented with 2

. Category agreement between the broth and disk test results for susceptible, susceptible dose-dependent and resistant disk results were 99.6

major discrepancies, and 8.97

minor discrepancies were observed between results of the two test methods. This analysis suggests that results from both methods correlate highly for Candida strains susceptible to fluconazole. The lower agreement between the two methods for resistant and susceptible dose-dependent isolates was due to strains near or on that breakpoint, different media (Mueller-Hinton vs RPMI), agar vs broth, 80

endpoints, and trailing growth near the endpoints.

Estudio comparativo de los genotipos de Candida albicans aislados de pacientes inmunocomprometidos y portadores sanos / [Comparative study of the Candida albicans genotypes isolated from immunocompromised patients and health carriers]

The aim of this study is to compare Candida albicans strain genotype isolates from oral cavity of immunocompromised patients due to different immunologic impairments with apparently normal carriers. Four populations were studied: 1) HIV positive hospitalized patients, 2) HIV negative immunocompromised patients (leukemia, lymphoma, organ transplant recipients), 3) drug addicts prior to AIDS pandemia in Argentina, 4) apparently normal carriers. DNA extracted was digested with the enzyme Eco RI, electrophoresed, transferred to nitrocellulose membrane and hybridized with the 27A probe labelled with 32P. The comparison between the profiles obtained permitted the differentiation of 16 genotypes. The distribution of the strains led to the conclusion that: a) all the isolated strains from AIDS patients were closely related and distributed in only three genotypes (1, 3, 11); b) a major genetic relationship between the isolates from AIDS patients and HIV negative immunocompromised patients was observed; c) strains from carriers showed a minor genetic similarity with those obtained from AIDS patients; d) characteristic profiles belonging to any of the studied groups were not found; e) significant genomic changes have not been observed during the last twenty years.

Utilidad del enzimoinmunoensayo para el serodiagnóstico de la histoplasmosis asociada al SIDA / Usefulness of ELISA in the serodiagnosis of histoplasmosis associated with AIDS

La histoplasmosis es la segunda micosis sistémica potencialmente fatal asociada a la infección por HIV en la República Argentina. Las pruebas serológicas que se emplean rutinariamente en el diagnóstico de esta micosis, tales como inmunodifusión (ID) y fijación de complemento (FC), han presentado un bajo índice de resultados positivos c en los pacientes con SIDA. El propósito de este estudio es estandarizar una reacción de ELISA a fin de mejorar la sensibilidad del serodiagnóstico en la histoplasmosis asociada al SIDA. Se preparó un exoantígeno de la fase levaduriforme de Histoplasma capsulatum (H.c.) que fue utilizado en la reacción de ELISA a la concentración de 5 g de proteína por mililitro. Este reactivo se obtuvo de acuerdo a una técnica expuesta en un estudio anterior. Se ensayaron procedimientos de ELISA en fase sólida, utilizando macro y micrométodos con técnica indirecta no competitiva. Como reactivos básicos se emplearon suero de conejo anti-IgG humana marcado con peroxidasa de rábano y ortofenilendiamina, como conjugado y sustrato respectivamente. Las reacciones fueron leidas espectrofotométricamente a 490 nm. El punto de corte fue calculado como la media de los valores observados en los sueros controles más tres desviaciones estandar. Se estudiaron 26 sueros de pacientes con histoplasmosis mediante el método cuantitativo, 12 de ellos presentaron reacciones positivas con títulos que variaron de 1/2.000 a 1/64.000. Con el micrométodo cualitativo se examinaron 36 sueros de pacientes con histoplasmosis, que fueron procesados a la dilución de 1/400 y 1/800. El 78 por ciento de los mismos presentaron resultados positivos mediante esta técnica, en tanto que la ID y FC sólo brindaron el 33 por ciento y el 47 por ciento de positividad respectivamente. Como controles se estudiaron 8 sueros de dadores de sangre aparentemente sanos y 8 muestras de suero de cada una de las siguientes enfermedades: paracoccidioidomicosis, criptococosis, aspergilosis, candidiasis y tuberculosis. Se comprobaron reacciones cruzadas con suero de paracoccidioidomicosis, aspergilosis y candidiasis. Los métodos de ELISA estudiados demostraron ser más sensibles que las pruebas de ID y FC para el serodiagnóstico de la histoplasmosis asociada al SIDA

Blood culture as a parameter of treatment effectiveness in experimental histoplasmosis of the hamster

The aim of this study was to determine the value of blood culture as a parameter of treatment efectiveness in experimental histoplasmosis. A total of thirty five hamsters, weighing approximately 120g, were inoculated intracardiacly with 0.1 ml of a suspension containing 4 x 10 a setima potencia cells/ml of the yeast phase of H. capsulatum. Treatments were started one week after the infection and lasted for 3 weeks...

Estudio comparativo de la patogenicidad y la antigenicidad de 6 cepas de Paracoccidioides brasiliensis / Comparative study of pathogenicity and antigenicity of six Paracoccidioides brasiliensis strains

Fueron estudiadas en forma comparativa 6 cepas de P. brasiliensis con el proposito de determinar su patogenicidad para la rata y su antigenicidad. Las mismas fueron aisladas de: 1) biopsia de cuello uterino en 1989 (U), 2) biopsia de mucosa bucal en 1988 (V), 3) aspiracion osea en 1991 (63265), 4) testiculo de cobayo 1984 (C24), 5) puncion-aspiracion ganglionar en 1986 (G) y 6) cepa proveniente de la Escola Paulista de Medicina (339). Se prepararon antigenos citoplasmaticos liofilizados de cada una de ellas, en la concentracion final de 100mg/ml y se realizaron pruebas de inmunodifusion frente a 6 sueros patrones positivos de ratas....

Tratamiento de la coccidioidomicosis experimental en ratas Wistar / Experimental treatment of coccidioidomycosis in Wistar rats

Se realizó un estudio comparativo entre Itraconazol (I) y Fluconazol (F) en el tratamiento de la coccidioidomicosis experimental en ratas Wistar. Treinta animales de 250 g de peso fueron inoculados con 200 artroconidias de Coccidioides immitis por vía intercardíaca. Ambas drogas fueron administradas por gastroclisis a razón de 200 mg//kg/día durante 5 semanas a partir del 7 día post-inoculación. El grupo control recibió el solvente de las drogas. Los animales que sobrevivieron 2 semanas después de concluído el tratamiento fueron sacrificados y se le realizaron los siguientes estudios: 1) examen macroscópico (presencia de granulomas) y microscópico (presencia de esporangios) en los pulmones; 2) unidades formadoras de colonias en homogeneizado de pulmones; 3) estudio histopatológico de pulmones con H & E realizando una evaluación semi-cuantitativa contando: a) número de granulomas por campo de 50x; b) número de esporangios con esporangiosporos en cada granuloma y c) número de esporangios vacíos. Los resultados obtenidos mostraron que el itraconazol fue más eficaz que el fluconazol en el tratamiento de este modelo experimental, en la evaluación efectuada a través de varios de los parámetros considerados: 1) se comprobaron menor cantidad de cultivos pulmonares positivos, (30 por ciento vs 100 por ciento); 2) menor número de UFC/g de pulmón (<1x10 vs 1.7x10 ); 3) menos cantidad de granulomas pulmonares en el estudio histopatológico (1/14 campos vs 1/4 campos); 4) menor cantidad de esporangios por granuloma (0 vs 33) y 5) mayor número de esporangios vacíos o alterados. Cabe señalar, sin embargo, que el fluconazol fue capaz de reducir el número de UFC/g pulmón,comparando con el grupo control

Estudio de un modelo de candidiasis sistemica experimental en ratones rockland / Model of experimental systemic candidosis in Rockland mice

Se presentan los resultados obtenidos en el estudio de un modelo de candidiasis sistémica en ratones rockland. Un total de 65 animales fueron inoculados por vía intracardíaca con 7.5 x 10.5 células de C.albicans. La mitad de los animales murieron en la primera semana y el 80% habían muerto al completar la segunda semana post-infección. En los animales que sobrevivieron hasta la cuarta semana se comprobó la existencia de lesiones renales activas con cultivos positivos para C.albicans. El tratamiento con anfotericina B por vía intraperitoneal modificó el curso de la infección, ya que la totalidad de los 15 animales tratados sobrevivió cuatro semanas y 5 exhibieron cultivos renales negativos. Las pruebas de contrainmunoelectroforesis con antígeno citoplasmático de C.albicans solo dieron resultados positivos en 7/18 ratones que vivieron hasta la cuarta semana. No hubo correlación entre los resultados de estas pruebas serológicas y la gravedad de las lesiones comprobadas en la autopsia.

Estudio de la nocardiosis sistémica experimental en hamsters (mesocricetus auratus) / Study of experimental systemic nocardiosis in hamsters (mesocricetus auratus)

Se presenta el estudio de un modelo experimental de nocardiosis sistémica en hamsters adultos. Se utilizaron en total 62 animales que fueron inoculados por vía intracardíaca con 0,1 ml. de una suspensión estandarizada de nocardia asteroides. Fueron determinados los siguientes parámetros: 1) evolución espontánea de la infección experimental (curva de muerte); 2) hemocultivos; 3) examen macroscópico de todos los órganos; 4) exámenes microscópicos de extendidos teñidos por la técnica de Kinyoun de riñones, bazo, hígado, pulmones y cerebro y 5) cultivos de los órganos antes señalados en medio de Czapek líquido sin sacarosa y con tiras de papel de filtro embebidas en parafina. Pudo establecerse que esta nocardiosis experimental posee dos fases. La fase aguda tiene una alta tasa de mortalidad (solo 40% de los hamsters sobrevivió más de 10 días) y los hemocultivos fueron positivos así como los cultivos de la mayoría de los órganos examinados. Después de los 14 días de evolución la enfermedad tiende hacia la cronicidad con persistencia de lesiones activas en riñones y peritoneo. Este modelo experimental puede ser útil para evaluar la eficacia de drogas antimicrobianas sobre las fases aguda y subaguda de la nocardiosis sistémica, así como para el estudio de antígenos para las reacciones serológicas.

Treatment of experimental sub-acute Cryptococcosis in the wistar rat

Se presenta un estudio comparativo entre el itraconazol y la anfotericina B en el tratamiento de la criptococosis experimental de ratas Wistar. Se utilizaron en total 100 animales inoculados por vía intracardíaca con 2 x 10**5 células de C. neoformans. Fueron utilizados 2 esquemas terapéuticos: el tratamiento curativo comenzó al décimo día de la inoculación desafiante y continuó durante 15 días, en tanto que el tratamiento preventivo fue iniciado 3 días después de la misma. Los animales inoculados fueron divididos en 8 grupos, 4 pertenecientes a cad esquema terapéutico: 1) tratados con itraconazol; 2) tratados con anfotericina B; 3) controles a los que recibieron polietilenglicol 200, y 4) controles q loa que se les administró agua destilada. El itraconazol fue dado por gastroclisis a razón de 16 mg/Kg/día y la anfotericina B se suministró por vía intraperitoneal en dosis de 6 mg/Kg/día por medio. Las ratas utilizadas como control recibieron polietilenglicol 200 por gastroclisis o agua destilada por vía intraperitoneal. La avolución de los resultados terapéuticos fue realizada por autopsia de los animales, que se efectuó una semana después de haber finalizado los tratamiento e incluyó estudios microscópicos de los pulmones y cultivos de los cerebros. En las condiciones expuestas, el itraconazol redujo el número de las lesiones pulmonares, pero fue incapaz de esterelizar los cultivos de cerebro. La anfotericina B presentó un mayor grado de eficacia en el tratamiento preventivo, ya qye obtuvo la negativación de los cultivos cerebrales en el 70% de las ratas; por el contrario, con el esquema curativo, no se observaron diferencias significativas respecto de los controles

Hongos anemófilos de la ciudad de La Plata y preparación de sus antígenos / Anemophilic fungi from La Plata city and preparation of their antigens

Se aislaron hongos anemófilos de la ciudad de La Plata por exposición simple de placas de Petri con medio de Sabouraud adicionados de antibióticos. Los microorganismos fueron obtenidos puros en los cultivos donde se examinaron los caracteres macro y micromorfológicos con el objeto de clasificarlos. Se comprobó un predominio franco de Alternaria, Penicillium, Acremonium, Drechslera y algunas especies de Aspergillus. Con los hongos más frecuentemente aislados se elaboraron preparaciones antigénicas obtenidas del sobrenadante del micelio roto. Simultáneamente fueron inmunizados dos cobayos para cada especie con una suspención de micelio muerto por tindalización. Finalizado el plan de inmunización, estos animales fueron sangrados y se les efectuó pruebas de contrainmunoelectroforesis e inmunodifusión y más tarde se les practicó intradermorreacción con biopsia cutánea a las 2 y 4 horas. No pudo demostrarse la presencia de anticuerpos precipitantes por las pruebas de inmunoprecipitación en medio gelosado, pero los estudios histológicos de las pruebas cutáneas de lectura rápida permitieron comprobar la presencia de un fenómeno de Arthus

Estudio micológico en muestras de tierra de la ciudad de La Plata / Mycological study in soil samples of La Plata city

Damos a canocer el estudio realizado sobre 100 muestras de tierra de la ciudad de La Plata. De la flora queratofítica, el género más frecuente fue el Microsporum gypseum (89%) y de la flora indígena la prevalencia del gênero Alternaria alcanzó un 79%, se encontraron altos porcentajes de Penicillium 34%, Aspergillus 45%, Absidia 37%, Chrysosporium 29%, Clodosporium 23%. Estos hongos, en circunstancias especiales, pueden provocar micosis viscerais oportunistas graves